A paviai születésű Ambrogio Maestri szülővárosában tanult éneket és zongorát. 2001-ben a Riccardo Muti vezényelte és Giorgio Strehler rendezte Falstaff címszerepében szenzációs sikerrel debütált, az előadást a milánói Scalában és a bussettói Teatro Verdiben játszották. Szerepértelmezése elragadtatott kritikákat kapott a nemzetközi sajtóban és a világ legrangosabb operaházainak kapuit nyitotta meg előtte. Sikeres együttműködése Riccardo Mutival a következő három évadban további fellépéseket hozott a Scalában, ahol emblematikus Verdi-szerepeket énekelhetett: Jágó (Otello), Renato (Álarcosbál), Giorgio Germont (Traviata), Don Carlos di Varga (A végzet hatalma). A legnevesebb operatársulatok vendégeként (Metropolitan Opera, Opera de Paris, Covent Garden, bécsi Staatsoper, berlini Deutsche Oper) újabb Verdi-szerepekben lépett színpadra: Luna gróf (A trubadúr), Amonasro (Aida), továbbá a Simon Boccanegra, a Rigoletto és a Nabucco címszerepei. 2012-ben a Veronai Aréna Aida-előadásában ünnepelte 100. fellépését Amonasro szerepében. Maestri pályája során olyan karmesterekkel dolgozott együtt, mint Zubin Mehta, Daniele Gatti, Antonio Pappano, Daniel Harding, továbbá olyan rendezők munkáiban lépett fel, mint Franco Zeffirelli, Robert Carsen, Graham Vick, Peter Stein vagy Robert Wilson. Az utóbbi négy évben Maestri érdeklődése Puccini és a verismo felé fordult. A Toscában Torre del Lagóban lépett fel először, majd Parasztbecsületet énekelt a Metropolitan Operában és Bajazzókat a Scalában. 2013-ban Verdi születésének 200. évfordulójára emlékezett a világ, Ambrogio Maestri pedig Falstaff szerepének emblematikus alakítójává vált. Ebben az évben énekelte Sir John szerepét a Scalában, a párizsi Operában, a zürichi Operában, a Salzburgi Ünnepi Játékokon, továbbá Münchenben, Tokióban és a New York-i Metben, ahol 200. alkalommal lépett színre Falstaff jelmezében. 2013-ban Nabuccót énekelt a Veronai Arénában, Amonasrót a Scalában, Veronában és Tokióban, valamint Simon Boccanegrát a torinói Teatro Regióban.
